志賀氏菌該怎么檢驗(yàn)
志賀氏菌屬細(xì)菌能釋放強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，是引起人體全身反應(yīng)的因素，造成的感染是我國(guó)夏秋季常見(jiàn)的以腹瀉為主的急性腸道傳染病。在環(huán)境衛(wèi)生及衛(wèi)生習(xí)慣不良的情況下，并易于流行。
那么到底什么是志賀氏菌呢？我們又能夠怎么去檢驗(yàn)食品中的志賀氏菌？
什么是志賀氏菌
志賀氏菌（Shigella Castellani）是一類革蘭陰性短小桿菌，是人類細(xì)菌性痢疾最為常見(jiàn)的病原菌，由于不干凈的水源、食物等，主要流行于發(fā)展中國(guó)家，通稱痢疾桿菌，耐寒，能在普通瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)過(guò)24小時(shí)生長(zhǎng)，形成直徑達(dá)2mm大小、半透明的光滑型菌落。
在腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基上形成無(wú)色菌落。大小為0.5～0.7×2～3μm，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜，無(wú)鞭毛，多數(shù)有菌毛。革蘭氏陰性桿菌，是人和靈長(zhǎng)類動(dòng)物的腸道致病菌，引起細(xì)菌性痢疾。
（▲志賀氏菌顯色培養(yǎng)基）
檢驗(yàn)步驟方法
培養(yǎng)基與試劑
志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素、糖發(fā)酵管、蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑、志賀氏菌屬診斷血清、API生化鑒定試劑盒
麥康凱（MAC）瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽（XLD）瓊脂、志賀氏菌顯色培養(yǎng)基、三糖鐵（TSI）瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面、半固體瓊脂、葡萄糖銨培養(yǎng)基、尿素瓊脂、β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基、西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基、粘液酸鹽培養(yǎng)基
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檢驗(yàn)流程
詳細(xì)步驟
第 1 步
增菌
以無(wú)菌操作取檢樣25g（mL），加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器，8000r/min～10000r/min均質(zhì)；或加入裝有225 mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1min～2min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±1℃，厭氧培養(yǎng)16h～20h。
第 2 步
分離
取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上，于36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個(gè)菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察，則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。志賀氏菌在不同選擇性瓊脂平板上的菌落特征見(jiàn)下表1。
第 3 步
初步生化試驗(yàn)
自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，分別接種TSI、半固體和營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面各一管，置36℃±1℃培養(yǎng)20h～24h，分別觀察結(jié)果。
凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸（發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，蔗糖）、不產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體）、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無(wú)動(dòng)力的菌株，挑取已培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型。
第 4 步
生化試驗(yàn)
用已培養(yǎng)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上生長(zhǎng)的菌苔，進(jìn)行生化試驗(yàn)，即β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥(niǎo)氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗(yàn)。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬。
志賀氏菌屬生化特性見(jiàn)下表2。
注意 由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似，必要時(shí)還需加做靛基質(zhì)、甘露醇、棉子糖、甘油試驗(yàn)，也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。
附加生化試驗(yàn)
由于某些不活潑的大腸埃希氏菌、A-D菌的部分生化特征與志賀氏菌相似，并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集；因此前面生化實(shí)驗(yàn)符合志賀氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖胺、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)（36℃培養(yǎng)24h～48h）。
志賀氏菌屬和不活潑大腸埃希氏菌、A-D菌的生化特性區(qū)別見(jiàn)下表3。
第 5 步
血清學(xué)鑒定
志賀氏菌屬?zèng)]有動(dòng)力，所以沒(méi)有鞭毛抗原。志賀氏菌屬主要有菌體（O）抗原。菌體O抗原又可分為型和群的特異性抗原。一般采用1.2%～1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。
1、在玻片上劃出2個(gè)約1cm×2cm的區(qū)域，挑取一環(huán)待測(cè)菌，各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加1 滴抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水，作為對(duì)照。再用無(wú)菌的接種環(huán)或針?lè)謩e將兩個(gè)區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。
2、將玻片傾斜搖動(dòng)混合1min，并對(duì)著黑色背景進(jìn)行觀察，如果抗血清中出現(xiàn)凝結(jié)成塊的顆粒，而且生理鹽水中沒(méi)有發(fā)生自凝現(xiàn)象，那么凝集反應(yīng)為陽(yáng)性。如果生理鹽水中出現(xiàn)凝集，視作為自凝。這時(shí)，應(yīng)挑取同一培養(yǎng)基上的其他菌落繼續(xù)進(jìn)行試驗(yàn)。
注意 如果待測(cè)菌的生化特征符合志賀氏菌屬生化特征，而其血清學(xué)試驗(yàn)為陰性的話，則挑取菌苔于1mL生理鹽水做成濃菌液，100℃煮沸15min～60min去除K抗原后再檢查。
第 6 步
結(jié)果報(bào)告
綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報(bào)告25g（mL）樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。
文 | 參考《GB 4789.5-2012 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》
圖 | 來(lái)源網(wǎng)絡(luò)